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尊龙凯时人小胶质细胞HMC3培养指南

来源:巩泰滢 日期:2025-03-17

尊龙凯时人小胶质细胞HMC3培养说明书

尊龙凯时人小胶质细胞HMC3培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称:人小胶质细胞HMC3

生长特性:贴壁生长

冻存条件:无血清冻存液

培养体系:MEM+10%FBS+1%P/S

传代方法:第一次建议1:2传代,传代情况可在2天后更换培养液。

备注:使用无菌离心管收集培养基,留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳,建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理方法

在收到细胞后,将其培养至良好状态,然后灌满完全培养液并密封瓶口,这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后,请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒,随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以便稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况,并在不同倍数下拍照保存(最好在40x、100x和200x下各拍一张)。前三天的照片是重要的售后依据,未提供照片则默认收到的细胞状态良好。建议在传代后,一瓶使用原瓶的完全培养基,另一瓶使用自己配制的完全培养基,以便进行对比培养并在换液后略微松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时,收集瓶装的完全培养液至离心管中,留5ml完全培养基并置于37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超80%,请按以下步骤进行传代:

  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,在37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞状态,若大部分细胞变圆并脱落,迅速返回操作台,轻敲培养瓶后加入5ml完全培养基以终止消化。
  3. 轻轻吹打细胞,使其完全脱落后吸出,再将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM下离心5分钟。弃去上清,加入1-2ml完全培养基重悬。
  4. 按照1:2的比例分瓶传代(两个T25瓶),并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

  1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时,弃去培养液,并用PBS清洗细胞一次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000RPM下离心5分钟。
  3. 弃去上清,沉淀细胞,加入1ml尊龙凯时无血清冻存液(货号:C7001),混匀后倒入冻存管中。
  4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如需将细胞转入液氮罐,则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

  1. 从液氮中取出冻存管(注意佩戴防护面具),迅速将其置于37℃水浴中解冻,直至不再有冰晶。随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
  2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000RPM离心5分钟。
  3. 弃去上清,重悬细胞于5ml完全培养基中,并接种至T25培养瓶内,放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
  4. 第二天更换为新鲜完全培养基,继续培养。

四、注意事项

一些细胞在贴壁时不够牢固,可能在运输过程中脱落,这属正常现象。如细胞脱落较多,可将培养瓶的所有培养液收集至离心管中,并在1000RPM下离心5分钟,收集上清作为过渡培养(后期对比培养)。将沉淀与1-2ml胰酶混合,轻轻吹打重悬,消化1-2分钟后,加入5ml完全培养基以终止反应。再进行离心,弃去上清,重悬于1-2ml完全培养基中,并以1:2比例进行分瓶传代(两个T25瓶),最后将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1)细胞问题的重发情况与判定标准:

  • 细胞在运输途中出现问题,如丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等,可申请重发。
  • 若细胞出现污染问题,请在收到细胞48小时内提供真实实验结果,经核实后可申请重发。
  • 对于常温发货的细胞,静置24小时后或干冰冻存发货的细胞复苏24小时后,若大多数细胞未存活(需提供真实细胞状态照片),可申请重发。
  • 如干冰保存细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时且未开封,出现污染,可以申请重发。
  • 关于细胞活性的问题,请在收到细胞7天内提供真实实验结果,使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经过核实后可申请重发。
  • 在收到细胞当日及第2、3天拍照留存,若超过3天未告知,视为产品合格。若4-7天内出现问题,需提供收到细胞前3天的照片和出现问题时的照片,以及相关操作的详细步骤,并与技术人员沟通,若判定为我方责任则可申请重发。
  • 如技术人员判定为双方承担责任,将进行协商处理或按照合同价的50%收费进行重发。

2)不予重发的情况:

  • 客户因操作不当造成的细胞污染不予重发。
  • 不正确操作导致的细胞状态不佳不予重发。
  • 尊龙凯时推荐的培养体系造成的细胞状态不佳不予重发。
  • 细胞状态不佳且未提供细胞培养前3天的照片不予重发。
  • 对细胞进行了其他处理的情况不予重发。
  • 若在收到细胞2天内未告知问题的则不予重发。
  • 具体情况视案情而定。
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