尊龙凯时人小胶质细胞HMC3培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S

传代方法：第一次建议1:2传代，传代情况可在2天后更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理方法

在收到细胞后，将其培养至良好状态，然后灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并在不同倍数下拍照保存（最好在40x、100x和200x下各拍一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认收到的细胞状态良好。建议在传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养并在换液后略微松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时，收集瓶装的完全培养液至离心管中，留5ml完全培养基并置于37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超80%，请按以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟。弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后倒入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如需将细胞转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直至不再有冰晶。随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，并接种至T25培养瓶内，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

一些细胞在贴壁时不够牢固，可能在运输过程中脱落，这属正常现象。如细胞脱落较多，可将培养瓶的所有培养液收集至离心管中，并在1000RPM下离心5分钟，收集上清作为过渡培养（后期对比培养）。将沉淀与1-2ml胰酶混合，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基以终止反应。再进行离心，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中，并以1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），最后将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞问题的重发情况与判定标准：

• 细胞在运输途中出现问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等，可申请重发。
• 若细胞出现污染问题，请在收到细胞48小时内提供真实实验结果，经核实后可申请重发。
• 对于常温发货的细胞，静置24小时后或干冰冻存发货的细胞复苏24小时后，若大多数细胞未存活（需提供真实细胞状态照片），可申请重发。
• 如干冰保存细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时且未开封，出现污染，可以申请重发。
• 关于细胞活性的问题，请在收到细胞7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经过核实后可申请重发。
• 在收到细胞当日及第2、3天拍照留存，若超过3天未告知，视为产品合格。若4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天的照片和出现问题时的照片，以及相关操作的详细步骤，并与技术人员沟通，若判定为我方责任则可申请重发。
• 如技术人员判定为双方承担责任，将进行协商处理或按照合同价的50%收费进行重发。

2）不予重发的情况：

• 客户因操作不当造成的细胞污染不予重发。
• 不正确操作导致的细胞状态不佳不予重发。
• 非尊龙凯时推荐的培养体系造成的细胞状态不佳不予重发。
• 细胞状态不佳且未提供细胞培养前3天的照片不予重发。
• 对细胞进行了其他处理的情况不予重发。
• 若在收到细胞2天内未告知问题的则不予重发。
• 具体情况视案情而定。